Réponse rapide : La CLHP mesure la pureté (quelle quantité de l'échantillon correspond au composé cible) ; la spectrométrie de masse confirme l'identité (si le composé est bien celui indiqué sur l'étiquette). Un CoA complet indique les deux, car un échantillon peut être pur tout en étant la mauvaise molécule.
Deux questions, deux instruments
Un certificat d'analyse répond à deux questions distinctes. S'agit-il de la bonne molécule, et quelle quantité de l'échantillon cette molécule représente-t-elle ? Chaque question nécessite un instrument différent.
HPLC : pureté
La chromatographie liquide haute performance pousse l'échantillon dissous à travers une colonne sous pression. Les composants se séparent selon la force de leur interaction avec le matériau de la colonne et sortent à des moments différents. Un détecteur enregistre un chromatogramme, une trace avec des pics. Le pic principal correspond au peptide cible ; les pics plus petits représentent des impuretés, des sous-produits ou des produits de dégradation. La pureté est l'aire du pic principal divisée par l'aire totale, exprimée en pourcentage.
Ce que la CLHP ne peut pas vous dire : ce qu'est réellement le pic principal. Le mauvais peptide peut toujours afficher un seul pic propre et un chiffre de pureté de 99%.
Spectrométrie de masse : identité
La spectrométrie de masse ionise l'échantillon et mesure le rapport masse/charge des ions. Le résultat est une masse moléculaire qui peut être comparée à la masse théorique calculée à partir de la séquence. Une correspondance dans les limites de tolérance de l'instrument confirme que la molécule correspond à ce que l'étiquette indique. Les COA modernes utilisent souvent la CL-SM, où la sortie de la CLHP alimente directement le spectromètre de masse, de sorte que les deux mesures proviennent d'une seule analyse.
Ce que la SM ne peut pas vous dire d'elle-même : quelle quantité de l'échantillon correspond à la cible. Elle confirme l'identité, pas la proportion.
Les lire ensemble
- Haute pureté, la masse correspond : le matériau est conforme à sa description et globalement pur.
- Haute pureté, la masse ne correspond pas : mauvais composé ou version modifiée. Ne pas utiliser.
- La masse correspond, faible pureté : bon composé, impuretés importantes. Utilisable seulement si l'étude peut les tolérer.
- Un seul test a été signalé : le COA est incomplet. Demandez l'autre.
Autres tests que vous pourriez voir
Titrage de Karl Fischer pour la teneur en eau, dosages de la teneur en peptides (analyse des acides aminés ou UV), et tests d'endotoxines pour certaines applications. Ceux-ci affinent l'image mais ne remplacent pas la CLHP et la SM.
Sources
- Pharmacopée des États-Unis, chapitre général 621, Chromatographie.
- Conseil international d'harmonisation, ICH Q6B : Spécifications relatives aux produits biotechnologiques et biologiques.
Tous les produits Browse Peptides sont fournis pour la recherche en laboratoire uniquement et ne sont pas destinés à un usage humain ou vétérinaire. Cet article résume la littérature publiée à des fins de référence pour la recherche et ne constitue pas un avis médical, un protocole ou une recommandation d'aucune sorte.
